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蛹虫草菌种食用菌扎口机复壮技术的研究

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蛹虫草菌种食用菌扎口机复壮技术的研究

发布日期:2017-08-20 00:00 来源:http://www.gxjxxpc.com 点击:

    我所经过多年研究,食用菌扎口机人工驯化栽培蛹虫草获得成功,并实现了规模化生产。但在生产实践中,我们遇到了一个普遍性的难题,就是蛹虫草菌种的遗传变异显著,优良性状不能完全稳定遗传,且极易老化或退化。一般来说,从野生蛹虫草菌株中分离的一个较好菌株,幸运的话可能会使用1~2年,保持优质高产。但通常是使用半年左右,甚至是传种几代后菌种就严重退化,表现特征是不长或只长出极少量子实体,而且质量极差,给批量栽培带来极大的风险。为了降低这种因菌种退化而带来的风险,我们在菌种复壮方面做了大量工作,获得了适合于蛹虫草菌种复壮的较好方法。现介绍如下,供广大同行参考。

    1 材料与方法

    1.1 试验材料 

  ① 菌株cm-A,由本实验室提供。

  ② 培养基及培养条件:

  培养基配方:1000mL培养基中土豆200g,蔗糖30g,硫酸镁1.5g,磷酸二氢钾3g,VB1,1mg。最后调pH为6~6.5(固体培养基加2%的琼脂粉即可)。土豆去皮后称200g,切小块,煮开后继续煮0.5h,4~5层纱布过滤,高压灭菌30min。

  培养条件:24~25℃静止培养2d后,120r/min,培养5d。

    1.2 试验方法

    1.2.1 组织分离法 选无杂菌的罐头瓶中长度2~3cm状态好的子实体,用无菌水冲洗,刮掉表层,取肉质1mm大小于斜面培养基上,24~25℃培养15d,菌丝布满斜面,再经子实体栽培,反复筛选,得到菌株cm~B。

    1.2.2 孢子分离法 选择形态好、生长势健壮并能代表该品种性状的接近成熟子实体,悬挂式采孢子于PDA固体培养基上,24~25℃培养成单个菌落,再将单个菌落移到斜面培养基上,继续培养到菌丝布满斜面。然后经子实体栽培,反复筛选,得到菌株cm-C。

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    1.2.3 虫体回接法 将试验室保存的母种cm-A接种到液体培养基中培养成菌悬液5层纱布过滤,滤液待用。取刚化蛹的柞蚕蛹,用75%乙醇消毒。用医用注射器将上述菌液注射到蛹体内,24~25℃培养变成僵蛹。取长满菌丝的体内组织粒到PDA斜面,24~25℃条件下继续培养到菌丝布满斜面,再分离纯化得到菌株cm-D。

    1.2.4 耐高温试验 将复壮后的新菌株各取1支试管种置34℃恒温箱24h。

    1.2.5 菌丝生长试验 将复壮后的新菌株及亲本菌株各取一小块接种到盛有PDA固体培养基的培养皿中央,24~25℃下培养3d开始观察,观察10d后结束试验。

    1.2.6 子实体栽培 取cm-A、cm-B、cm-C、cm-D相同大小、数量的菌块接种到PDA液体培养基中,24~25℃静止培养2d后,120r/min摇床振荡培养5d,接种米饭罐头瓶中,每个测试样30瓶,相同管理条件下培养、观察,计算平均单瓶产量(鲜重)。

    2 结果与分析

    2.1 耐高温试验 将复壮菌株cm-B、cm-C、cm-D试管菌丝置34℃恒温箱24h,未发现吐黄水,但生长速度变得缓慢,重新置24℃环境中,恢复了原有的生长速度,说明复壮菌株能耐一定高温。

    2.2 菌丝生长情况 cm-B、cm-C、cm-D与亲本cm-A相比,菌丝日平均生长量都有提高,具体见表1。

    表1 菌种复壮前后菌丝生长情况(mm)

    菌 株    cm-A  cm-B  cm-C  cm-D

    日均生长 4.12  5.21  5.51  5.84

    2.3 子实体栽培试验 三种方法复壮的菌种经子实体栽培试验,通过观察比较,发现cm-D转色最快,cm-B及cm-C次之。出草天数均提前4~5d,而且子实体比较均匀,且个数多,从而产量也有明显的提高。具体见表2。

    3 讨论

    通过上述试验,可以看出,蛹虫草的菌种复壮采用这三种方法均是可行的。但因蛹虫草菌种要求外界条件严格,受外界因素影响明显,仅以常规方法进行复壮,还不能真正解决菌种退化问题。目前,研究发现组织细胞产生的脱氢酶与细胞活力成正比,通过对脱氢酶的测定来提早淘汰退化菌株,减少损失。下一步我们主要从遗传物质DNA入手,通过分子标记技术RFLP和RAPA。比较正常菌株和退化菌株在基因水平的变异情况,利用电泳图谱观察与退化特征相联系的特异条带,确定突变基因,想办法“治疗”发生变异的基因,最终找到一种很好的解决菌种退化问题的办法。



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